超聲波破碎的適用范圍
超聲波破碎是很激烈的破碎辦法,適用于少數(shù)微生物的破碎。
普通桿菌比球菌易破碎,G-細(xì)菌比G+細(xì)菌易破碎,對(duì)酵母菌的效果較差。
但超聲波發(fā)生的化學(xué)自在基團(tuán)能使某些敏理性活性物質(zhì)失活。
超聲波破碎的無(wú)效能量應(yīng)用率極低
由于對(duì)冷卻的要求相當(dāng)苛刻,所以不易縮小,但在實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模細(xì)胞破碎中常用。超聲波細(xì)胞破碎儀
超聲波細(xì)胞破碎儀運(yùn)用留意事項(xiàng): 1 、切記空載(一定要將超聲變幅桿拔出樣品后才干開機(jī),) 2、變幅桿(超聲探頭)入水深度: 1.5Cm 左右,液面高度有30mm以上,探頭要居中,不要貼壁。超聲波是垂直縱波,插入太深不容易構(gòu)成對(duì)流,影響破碎效率。 3、超聲參數(shù)設(shè)置:設(shè)置鍵好儀器任務(wù)參數(shù)(詳細(xì)設(shè)置見(jiàn)闡明書或來(lái)電征詢),關(guān)于對(duì)溫度要求比擬敏感的樣品(比方細(xì)菌)一般里面采用冰浴,實(shí)踐溫度一定是低于25度,蛋白核酸肯定不會(huì)變性。 1) 工夫:超聲時(shí)間每次不要超越5秒 ,間隙時(shí)間應(yīng)大于或等于超聲時(shí)間,以便于熱量分發(fā)。時(shí)間設(shè)定應(yīng)以超聲時(shí)間短,超聲次數(shù)多準(zhǔn)繩,可延伸超聲機(jī)子以及探頭的壽命。 2) 超聲功率: 不宜太大,以免樣品飛濺或起泡沫,如小于10ml樣品容量,功率應(yīng)在200w以內(nèi),選用2mm超聲探頭,另將面板前面的變幅桿選擇開關(guān)打到相應(yīng)擋;10-200ml樣品容量的功率在200-400w,選用6mm超聲探頭,另將面板后面的變幅桿打到相應(yīng)擋;200ml以上的樣品容量功率在300-600w之間,選用10mm超聲探頭,另將面板后面的變幅桿打到相應(yīng)擋;(2MM的小探頭功率嚴(yán)禁超過(guò)350W) 3) 容器選擇:有多少的樣品就選多大的燒杯,這樣也是有利樣品在超聲中對(duì)流,進(jìn)步破碎效率。例如;20ML的處置量用20ML的燒杯。 如100ml大腸桿菌樣品設(shè)置參數(shù): 超聲5秒 /間隙5秒 次數(shù)70次(總時(shí)間為10分鐘)。功率300W(僅供參考) 500ML左右的量,功率開到500W-800W左右 4、若樣品放在1.5ml的EP管里請(qǐng)一定要將EP管固定好,以防冰浴消融后液面下降招致空載 5、日常保養(yǎng):用完后用酒精擦洗探頭或用清水停止超聲. 超聲波細(xì)胞破碎儀
選擇破碎方法的根據(jù):
細(xì)胞處理量;
細(xì)胞壁強(qiáng)度和構(gòu)造(高聚物交聯(lián)水平、品種和壁厚度);
目的產(chǎn)物對(duì)破碎條件的敏感性;
破碎程度;
目標(biāo)產(chǎn)物的選擇性釋放.
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